Identificación de proteínas. Práctica virtual

Proteína HBZ
Las proteínas son moléculas formadas por cadenas de aminoácidos, al plegarse sobre sí mismas forman una estructura tridimensional. En los organismos vivos tienen funciones estructurales, formando parte del tejido vivo, funciones biorreguladoras, como las enzimas, y funciones de defensa, como los anticuerpos.

Los aminoácidos se unen en las proteínas mediante el enlace peptídico (- CO - NH -). El biuret es un compuesto químico de fórmula química NH2 - CO - NH - CO - NH2. Es un sólido blanco soluble en agua caliente. Fue estudiado por Gustav Heinrich Wiedemann en su tesis doctoral, en 1847. En presencia de iones Cu+2, el biuret forma un complejo de coordinación de color violeta, siendo una reacción identificativa de las proteínas, pero no de los aminoácidos.


Introducción

- Lectura: Wikipedia. Proteína


Guión de la práctica


Preparación del reactivo biuret y de la solución de proteína

El reactivo biuret se puede prepara in situ o tenerlo aparte. Para prepararlo in situ sobre la solución muestra, se añaden 2 centímetros cúbicos de solución de hidróxido de sodio al 20% (también puede ser hidróxido potásico), añadiéndose a continuación 4 ó 5 gotas de solución de sulfato cúprico diluida al 1%.

Para hacer el reactivo de biuret se emplea hidróxido de sodio (NaOH) y sulfato de cobre (II) hidratado (SO4Cu.H2O)., junto con tartrato de sodio y potasio para estabilizar los iones cúpricos.

- Disolver 1,5 g de SO4Cu.H2O en 250 ml de agua recién destilada

- Añadir 4,5 g de tartrato de sodio y potasio y 2,5 g de ioduro de potasio. Disolver bien todos los sólidos

- Añadir 50 ml de 6,0 mol/l de NaOH y diluir a 0,5 l con agua destilada

También existe la opción de comprar el reactivo de biuret. Aquí se pueden consultar los proveedores.

Para preparar la solución de proteína se empleará albúmina de huevo, disolviendo clara de huevo en agua.


Procedimiento

Las proteínas reaccionan con el reactivo de biuret. La reacción, en presencia de proteína, produce un color de biuret de azul a violeta.

Color característico de una prueba positiva biuret
Color característico de una prueba positiva biuret

1. Se llenan un tubo de ensayo con 2 mililitros de agua.

2. Se añaden 2 ml de reactivo de reactivo Biuret al agua. Anotar el color de la solución.

3. Se llenan un tubo de ensayo con 2 mililitros de solución con proteína. .

4. En el tubo de ensayo anterior, se añaden 2 mililitros de reactivo de biuret. Anotar el color de la solución.


Formas de realizar la práctica

1. En laboratorio.

2. En laboratorio casero. Los materiales son de fácil adquisición, el sulfato cúprico se emplea para tratar hongos en vegetales y el hidróxido sódico es la sosa caústica que se puede encontrar en droguerías.

¡Cuidado al manejar el hidróxido sódico o sosa caústica! Puede reaccionar violentamente con el agua por lo que se debe diluir poco a poco. Es corrosivo, por lo que hay que evitar el contacto con la piel (puede provocar quemaduras) y con los ojos (puede causar daños permanentes en la córnea).

3. De manera virtual.

Para ello, se puede utilizar el siguiente sitio web que simula todo el experimento:

- Práctica Virtual: OCCC-Biology Labs. Tests for proteins (en inglés)


Preguntas y actividades

1. ¿Cuál de los dos tubos de ensayo es positivo para las proteínas y cual es negativo?

2. ¿Por qué el biuret colorea las proteínas? Consultar los enlaces de ampliación y dibujar las reacciones.

3. ¿Por qué la reacción de biuret no se puede utilizar para identificar aminoácidos?


Para saber más y ampliar conocimientos

- Lectura: Departamento de Química - UNLP. Reacción de Biuret
- Lectura: Estrucplan on line. Seguridad en el uso de la soda caústica
- Lectura: U.N. Pedro Ruiz Gallo. Determinación de proteínas totales y albúmina (DOC)
- Lectura: Wikipedia. Biuret test (en inglés)


Principios de Biología

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